固相萃取柱常見問題
圣賓
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關(guān)于萃取柱使用時的常見問題，一般有回收率低、重現(xiàn)性差、凈化效果不佳、流速過快過慢這幾大方面，下面我們一一說明：
回收率低
原因分析：
①目標(biāo)物在填料上保留不足
判斷方法：空白溶劑加標(biāo)，回收上樣液和淋洗液，若實際檢測濃度超過含量的5%，說明保留不足。
可能原因
對策
SPE柱選擇不合適
選擇更強(qiáng)保留的SPE柱
樣品上樣液或淋洗液的洗脫強(qiáng)度過強(qiáng)
降低樣品上樣液或者淋洗液的洗脫強(qiáng)度
上樣體積/濃度過高，導(dǎo)致過載發(fā)生
減少上樣濃度或者增加填料量
操作過程中，小柱發(fā)生“干涸”現(xiàn)象
重新進(jìn)行活化/平衡，bao證小柱在淋洗結(jié)束不能發(fā)生“干涸”現(xiàn)象
②目標(biāo)洗脫不wanquan
判斷方法：空白溶劑加標(biāo)，回收上樣液和淋洗液，沒有檢出目標(biāo)物；但回收洗脫液，回收率也不高。
可能原因
對策
小柱保留太強(qiáng)
選擇保留稍弱的SPE柱
洗脫能力太強(qiáng)
增強(qiáng)洗脫強(qiáng)度
洗脫體積太小
增強(qiáng)洗脫體積
③其他原因
判斷方法：空白溶劑加標(biāo)，回收上樣液，淋洗液沒有檢出目標(biāo)物；回收洗脫液，回收率正常。
可能原因
對策
預(yù)處理的提取不足
改變提取溶劑
目標(biāo)物質(zhì)不穩(wěn)定，揮發(fā)或者分解
改變提取和轉(zhuǎn)移方式，減少加熱溫度，受PH影響較大的化合物可加入緩沖鹽調(diào)節(jié)PH等
預(yù)處理過程復(fù)雜
簡化預(yù)處理過程
目標(biāo)物與雜質(zhì)結(jié)合
換適當(dāng)?shù)姆椒ǔs質(zhì)
雜質(zhì)干擾效應(yīng)太強(qiáng)
改變處理方法或與基質(zhì)加標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行對比
雜質(zhì)過多，超出小柱zui高保留
改變預(yù)處理方法，減少上樣量或增加小柱填料量
重現(xiàn)性差的原因及對策
可能原因
對策
操作步驟繁瑣，人為誤差導(dǎo)致
改變處理方法或者制定SOP方法
復(fù)雜樣品基質(zhì)除雜效果不佳
改變整個處理方法，加入內(nèi)標(biāo)或與基質(zhì)加標(biāo)數(shù)據(jù)做對比
上樣過程發(fā)生干涸
重新活化平衡
發(fā)生堵柱現(xiàn)象或者流速過快
者改變預(yù)處理方法，后者使用止回閥控制流速
凈化效果不佳的對策
① 改變預(yù)處理方法
② 改變淋洗液和洗脫液的強(qiáng)度
③ 選擇合適的作用小柱
④ 正確進(jìn)行SPE操作
流速過快過慢的原因及對策
流速過慢的原因
對策
SPE選擇的粒徑過小
選擇大粒徑SPE
樣品預(yù)處理后仍有懸浮不溶物
上樣冷凍離心
樣品粘度太高
樣品稀釋
SPE阻力過大，液體無法靠重力滴落
使用手動固相萃取柱裝置，通過調(diào)節(jié)止回閥，氣門，抽負(fù)壓來調(diào)節(jié)流速
流速過快的原因
對策
SPE選擇的粒徑過大
選擇小粒徑的SPE
重力作用時流速依然很快
使用手動SPE裝置，調(diào)節(jié)止回閥
抽負(fù)壓時流速過快
調(diào)節(jié)止回閥和氣門，控制真空表壓力恒定在一定范圍內(nèi)
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